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如何避免PCR實驗室出現(xiàn)污染，有哪些辦法

發(fā)布時間： 2021-11-01　　點擊次數(shù)： 1120次

　　PCR實驗室又叫基因擴增實驗室，由于PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應用，不過正是由于它靈敏度*，極微量的污染源都有可能導致檢測結(jié)果的假陽性，因此，如何避免以及處理實驗室污染，對PCR人來說是一門必修課。
　　
　　一、樣本間交叉污染：
　　
　　主要是在采（?。拥倪^程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過程中，由于移液器、離心管等使用不當導致的污染。
　　
　　二、PCR試劑的污染：
　　
　　主要是在PCR試劑配制過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。
　　
　　三、克隆質(zhì)粒的污染：
　　
　　在PCR實驗室操作中經(jīng)常會用到陽性參考品，這些陽性參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成，克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用很容易造成污染。
　　
　　四、PCR擴增產(chǎn)物污染
　　
　　這是PCR反應中主要常見的污染問題。因為PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠遠高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可造成假陽性結(jié)果。還有一種容易忽視，可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染，在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，據(jù)計算一個氣溶膠顆?？珊?.8萬拷貝，因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。
　　
　　污染消除判斷標準：
　　
　　設計陰性對照組，根據(jù)陰性對照確認污染情況。可使用敞開后隔夜放置操作區(qū)的陰性對照進行實驗（在單獨的PCR實驗室驗證），若連續(xù)三天陰性對照沒有起跳，則說明污染得到控制，可恢復正常實驗。

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